Antiochus, koning van Comagena, een regio in Syrië, gehecht aan het Romeinse rijk, die trouw Titus dient en zijn koninklijke titel behoudt, is verliefd op Berenice. Hij wacht al lang op de gelegenheid om met Berenice te praten en erachter te komen wat haar beslissing is: als ze klaar is om Titus 'vrouw te worden, zal Antiochus Rome verlaten. Bij haar ontmoeting geeft Antiochus toe dat ze al vijf jaar verliefd op haar is sinds ze haar heeft ontmoet, maar Berenice antwoordt hem dat ze altijd alleen van Titus heeft gehouden en dat liefde voor haar kostbaarder is dan de macht en de kroon van de keizer.
Berenice praat met haar vertrouweling Foinika en zij suggereert dat het voor Titus moeilijk zal zijn om de wet te omzeilen. Maar Berenice gelooft in Titus en zijn liefde en wacht tot ze wordt begroet door de 'arrogante senaat'.
Ondertussen vraagt Titus aan zijn vertrouweling Pauline wat ze in Rome over hem en Berenice denken. De keizer is niet geïnteresseerd in de mening van een dienstbaar hof en edelen - ze staan altijd klaar om elke gril van Caesar te doorstaan, omdat ze 'alle laagheid van Nero' hebben doorstaan en goedgekeurd. Tita is geïnteresseerd in de mening van de mensen en Paulin antwoordt hem dat, hoewel Berenice schoonheid waardig is als kroon, niemand in de hoofdstad 'haar keizerin wil noemen'. Geen van de voorgangers van Titus schond de huwelijkswet. En zelfs Julius Caesar, die van Cleopatra hield, 'kon de Egyptenaar niet zijn vrouw noemen'. Zowel de wrede Caligula als de 'gruwelijke' Nero, 'na alles te hebben gecorrigeerd wat mensen al eeuwenlang eren', respecteerden de wet en 'ze zagen het verachtelijke huwelijk niet met hen'. En de voormalige slaaf Felix, die de procureur van Judea werd, was getrouwd met een van de zusters van Berenice, en niemand in Rome zou willen dat degene wiens zus de slaaf van gisteren naar haar man had gebracht de troon besteeg. Titus geeft toe dat hij lange tijd worstelde met liefde voor Berenice, en nu zijn vader is overleden en een zware last op zijn schouders heeft gelegen, moet Titus zichzelf in de steek laten. De mensen houden hem in de gaten en de keizer kan zijn regel niet beginnen met het overtreden van de wet, Titus besluit Berenice over alles te vertellen, hij is bang voor dit gesprek.
Berenice maakt zich zorgen over haar lot - Titus 'rouw om zijn vader eindigde, maar de keizer zwijgt. Ze gelooft dat Titus van haar houdt. Titus lijdt en durft Berenice niet te vertellen dat hij haar moet verlaten. Berenice kan niet begrijpen wat ze heeft gedaan. Misschien is hij bang om de wet te overtreden? Maar hij vertelde haar zelf dat geen wet hen kon scheiden. Misschien kwam Titus achter haar ontmoeting met Antiochus en sprak jaloezie in hem?
Titus ontdekt dat Antiochus Rome gaat verlaten en is zeer verrast en geïrriteerd - hij heeft zijn oude vriend nodig, met wie ze samen vochten. Titus vertelt Antiochus dat hij afscheid moet nemen van Berenice: hij is Caesar, die het lot van de wereld beslist, maar niet in staat is zijn hart te geven aan degene van wie hij houdt. Rome stemt ermee in zijn vrouw alleen als een Romein te erkennen - 'wat dan ook, ellendig - maar alleen door zijn bloed', en als de keizer geen afscheid neemt van de 'dochter van het Oosten', dan 'zal voor haar het boze volk haar uitzetting eisen'. Titus vraagt Antiochus haar te informeren over zijn beslissing. Hij wil dat zijn vriend, samen met Berenice, naar het Oosten vertrekt en goede buren in zijn koninkrijken blijft.
Antiochus weet niet wat hij moet doen - huilen of lachen. Hij hoopt dat hij op weg naar Judea Berenice zal kunnen overhalen om met hem te trouwen nadat Caesar haar had afgewezen. Arshak, zijn vriend, steunt Antiochië - hij zal naast Berenice staan en Titus is ver weg.
Antiochus probeert met Berenice te praten, maar aarzelt om direct te zeggen wat haar te wachten staat. Gevoel dat er iets niet klopte, eist Berenice eerlijkheid en Antiochus informeert haar over de beslissing van Titus. Ze wil niet geloven en wil alles zelf van de keizer leren. Antiochus verbiedt haar nu te benaderen.
Titus denkt, voordat hij Berenice ontmoet, wat te doen. Hij zit pas zeven dagen op de troon na de dood van zijn vader, en al zijn gedachten gaan niet over regeringsaangelegenheden, maar over liefde. De keizer realiseert zich echter dat hij niet van zichzelf is, hij is verantwoordelijk voor het volk.
Berenice verschijnt en vraagt hem of haar de waarheid is verteld? Caesar antwoordt dat het niet uitmaakt hoe moeilijk het voor hem is om zo'n beslissing te nemen, ze zullen moeten vertrekken. Berenice verwijt hem - hij had moeten zeggen over de Romeinse wetten toen ze elkaar pas ontmoetten. Het zou gemakkelijker voor haar zijn om een weigering te doen. Titus antwoordt Berenice dat hij niet wist hoe zijn lot zou aflopen en niet dacht dat hij keizer zou worden. Nu leeft hij niet - het leven is voorbij, nu regeert hij. Berenice vraagt waar Caesar bang voor is - opstanden in de stad, op het platteland? Titus antwoordt dat als 'de gewoonten van de belediging van de vader' onrust veroorzaken, hij zijn keuze zal moeten afdwingen 'en de stilte van het volk moet betalen', en het is niet bekend tegen welke prijs. Berenice stelt voor om de 'onrechtvaardige wet' te veranderen. Maar Titus legde een eed af aan Rome "de wet om hem te houden", het is zijn plicht, "er is geen andere manier, en we moeten die standvastig volgen." Het woord moet behouden blijven, zoals zijn voorgangers dat deden. Berenice verwijt Caesar wanhopig dat hij gelooft dat het zijn hoogste plicht is 'haar graf te graven'. Ze wil niet in Rome blijven 'een plezier voor de Romeinen, vijandig en boosaardig'. Ze besluit zelfmoord te plegen. Titus beveelt de bedienden om Berenice te volgen en te voorkomen dat ze haar plan voltooit.
Het nieuws van Caesars breuk met de koningin wordt door de hele stad verspreid: 'Rome verheugt zich, elke tempel staat open voor het volk'. Antiochus in opwinding - hij ziet dat Berenice 'in immens verdriet' rondrent en een dolk en gif nodig heeft.
Titus ontmoet Berenice opnieuw en ze kondigt hem aan dat ze vertrekt. Ze wil niet horen hoe de mensen zich verkneukelen. Titus antwoordt haar dat hij geen afstand van haar kan doen, maar hij kan de troon niet weigeren en het Romeinse volk niet in de steek laten. Als hij dat had gedaan en met Berenice was vertrokken, zou ze zich schamen voor 'een krijger zonder regimenten en Caesar zonder kroon'. Macht en huwelijk met de koningin zijn onverenigbaar, maar de ziel van de keizer kan zo'n kwelling niet meer verdragen - hij is bereid te sterven als Berenice hem niet zweert dat hij zijn handen niet zal overnemen.
Antiochus verschijnt - lange tijd verborg hij voor Caesar zijn liefde voor de koningin, maar hij kon zich niet meer verbergen. Nu hij ziet hoe ze lijden, is hij bereid ter wille van Caesar en Berenice om zijn leven aan de goden op te offeren, zodat ze genade hebben, Berenice, 'in schaamte geworpen' door de grootheid van de zielen van beiden, omdat hij zo'n bereidheid ziet om Titus en Antiochus op te offeren, smeekt hen niet zo te lijden voor haar is ze het niet waard. De koningin stemt ermee in gescheiden te leven en vraagt Titus haar te vergeten. Ze belt Antiochus om de liefde te vergeten. De herinnering aan alle drie blijft in de annalen als voorbeeld van de meest tedere, vurige en hopeloze liefde.